Ο προσδιορισμός συμπλήρωσης διμοριακού φθορισμού (BiFC) είναι μια μέθοδος που χρησιμοποιείται για την άμεση απεικόνιση της αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης in vivo χρησιμοποιώνταςαπεικόνιση ζωντανών κυττάρων ή σταθεροποιημένα κύτταρα. … Το BiFC περιγράφηκε για πρώτη φορά από τους Hu et al.
Πώς λειτουργεί η συμπλήρωση διμοριακού φθορισμού;
Η αρχή λειτουργίας του BiFC βασίζεται στην ανάπτυξη ενός φθορίζοντος συμπλόκου, ως αποτέλεσμα της σύνδεσης δύο τμημάτων μιας φθορίζουσας πρωτεΐνης όταν βρίσκονται σε κοντινή απόσταση λόγω της αλληλεπίδρασης πρωτεΐνης-πρωτεΐνης στα θραύσματα, π.χ., στο BiFC, ένα φθοροφόρο χωρίζεται σε αμινο και καρβοξυλικά τερματικά άκρα.
Τι είναι η δοκιμή BiFC;
διμοριακός προσδιορισμός συμπλήρωσης φθορισμού (BiFC) επιτρέπει την απλή και άμεση απεικόνιση των πρωτεϊνικών αλληλεπιδράσεων σε ζωντανά κύτταρα (45). Η προσέγγιση BiFC βασίζεται στον σχηματισμό ενός φθορίζοντος συμπλέγματος όταν δύο πρωτεΐνες συγχωνευμένες με μη φθορίζοντα θραύσματα μιας φθορίζουσας πρωτεΐνης αλληλεπιδρούν μεταξύ τους (Εικ.
Γιατί γίνεται η δοκιμή BiFC;
Η ιδέα του BiFC είναι να εκφράζει τα μισά GFP συγχωνευμένα με τις πρωτεΐνες που σας ενδιαφέρουν Εάν τα POI αλληλεπιδρούν, θα μπορούσατε να φέρετε και τα δύο μισά μαζί για να λάβετε ένα λειτουργικό GFP. Έτσι, εάν υπάρχει το μισό GFP που εκφράζεται στο κύτταρο, δεν εκπλήσσομαι που ένα αντίσωμα GFP μπορεί να το ανιχνεύσει.
Είναι το BiFC αναστρέψιμο;
Η μη αναστρεψιμότητα των συμπλοκών BiFC έχει τεκμηριωθεί καλά (10), και φαίνεται ότι τα περισσότερα, αν όχι όλα, συστήματα BiFC που βασίζονται σε φθορίζουσα πρωτεΐνη είναι μη αναστρέψιμα (8, 33, 43, 48–51).
