Μόλις δημιουργηθούν αρκετά αντίγραφα της αλληλουχίας με PCR, χρησιμοποιείται electrophoresis για τον διαχωρισμό των θραυσμάτων ανάλογα με το μέγεθος.
Πώς διαχωρίζονται τα θραύσματα DNA;
Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό θραυσμάτων DNA (ή άλλων μακρομορίων, όπως το RNA και τις πρωτεΐνες) με βάση το μέγεθος και το φορτίο τους. … Όλα τα μόρια DNA έχουν την ίδια ποσότητα φορτίου ανά μάζα. Εξαιτίας αυτού, η ηλεκτροφόρηση γέλης των θραυσμάτων DNA τα διαχωρίζει με βάση μόνο το μέγεθος.
Πώς διαχωρίζονται και απομονώνονται τα θραύσματα DNA για δακτυλικά αποτυπώματα DNA;
Τα θραύσματα DNA που σχηματίζονται με τη χρήση περιοριστικών ενδονουκλεασών διαχωρίζονται με ηλεκτροφόρηση γέλης(i) Τα θραύσματα DNA είναι αρνητικά φορτισμένα μόρια. Έτσι, κινούνται προς την άνοδο κάτω από ηλεκτρικό πεδίο μέσω του μέσου. … (iv) Οι διαχωρισμένες ζώνες DNA κόβονται και εξάγονται από τεμάχιο γέλης.
Ποιες μέθοδοι διαχωρισμού χρησιμοποιούνται για την απομόνωση του DNA;
Οργανική εκχύλιση περιλαμβάνει την προσθήκη και την επώαση σε πολλά διαφορετικά χημικά διαλύματα. συμπεριλαμβανομένου ενός σταδίου λύσης, μιας εκχύλισης με χλωροφόρμιο φαινόλης, μιας κατακρήμνισης αιθανόλης και σταδίων πλύσης. Η οργανική εκχύλιση χρησιμοποιείται συχνά σε εργαστήρια επειδή είναι φθηνή και αποδίδει μεγάλες ποσότητες καθαρού DNA.
Γιατί χρησιμοποιείται το βρωμιούχο αιθίδιο EtBr στην ηλεκτροφόρηση γέλης;
Το βρωμιούχο αιθίδιο (EtBr) προστίθεται μερικές φορές στο τρέχον ρυθμιστικό διάλυμα κατά τη διάρκεια του διαχωρισμού των θραυσμάτων DNA με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης. Χρησιμοποιείται επειδή με τη δέσμευση του μορίου στο DNA και τον φωτισμό με μια πηγή υπεριώδους φωτός, το σχέδιο ζωνών DNA μπορεί να οπτικοποιηθεί.
