Ακολουθεί μια επισκόπηση των διαφορετικών βημάτων ενός πρωτοκόλλου έμμεσης χρώσης ανοσοφθορισμού
- Σχεδιασμός πειράματος και προετοιμασία δειγμάτων. …
- Στερέωση δείγματος. …
- Διαπερατότητα κυττάρων. …
- Αποκλεισμός. …
- Πρωτογενής Επώαση Αντισωμάτων. …
- Δευτερογενής Επώαση Αντισωμάτων. …
- Counterstain and Mounting.
Πώς εκτελείτε τον ανοσοφθορισμό;
Όλα τα βήματα επώασης πραγματοποιούνται σε θερμοκρασία δωματίου
- Πλύντε τα κελιά δύο φορές και χρησιμοποιήστε τσιμπιδάκια για να τοποθετήσετε προσεκτικά την καλυπτρίδα με τα αναποδογυρισμένα κελιά στον υγροποιημένο θάλαμο.
- Στερεώστε με φορμαλδεΰδη 4 % για 10 λεπτά και πλύνετε 3 ×.
- Διαπερατότητα με 0,1 % TX-100/PBS για 15–20 λεπτά και πλύσιμο 3 ×.
Πώς χρησιμοποιείτε τον ανοσοφθορισμό σε ένα κύτταρο;
Πρωτόκολλο ανοσοφθορισμού για προσκολλημένα κύτταρα
- Σπόρος 1–1,5 x104 κύτταρα ανά φρεάτιο αντικειμενοφόρου πλάκας 4 θαλάμων σε 500 mL μέσου καλλιέργειας. Επώαση στους 37°C σε 5% CO2.
- 32–36 ώρες μετά τη σπορά των κυττάρων, αφαιρέστε το μέσο κυτταροκαλλιέργειας και ξεπλύνετε τα κύτταρα 3 φορές χρησιμοποιώντας 500 µL 1X PBS.
Τι είναι ένα παράδειγμα ανοσοφθορισμού;
Για παράδειγμα, ένας ερευνητής μπορεί να δημιουργήσει πρωτεύοντα αντισώματα σε μια κατσίκα που αναγνωρίζουν πολλά αντιγόνα και στη συνέχεια να χρησιμοποιήσει δευτερεύοντα αντισώματα κουνελιού συζευγμένα με βαφή που αναγνωρίζουν τη σταθερή περιοχή αντισώματος κατσίκας ( αντισώματα κουνελιού κατά της κατσίκας).
Ποια είναι η χρήση της χρώσης με ανοσοφθορισμό;
Η χρώση ανοσοφθορισμού (IF) είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη τεχνική στη βιολογική έρευνα και στην κλινική διάγνωση Η IF χρησιμοποιεί σημασμένα με φθορισμό αντισώματα για την ανίχνευση συγκεκριμένων αντιγόνων-στόχων. Ακολουθούμενη από απεικόνιση, είναι μια πολύ άμεση τεχνική καθώς μπορείτε να δείτε πραγματικά κάτι.
