Μπορεί κανείς να παγώσει και να ξεπαγώσει το ρυθμιστικό διάλυμα RIPA 2-3 φορές χωρίς να χάσει τη δραστηριότητά του για όσο διάστημα φυλάσσεται σε πάγο κατά τη χρήση του (20-30 λεπτά). Αποθηκεύστε το ρυθμιστικό διάλυμα κατεψυγμένο στους -80 βαθμούς C.
Πόσο καιρό μπορώ να διατηρήσω το buffer RIPA;
1. Εάν το ρυθμιστικό διάλυμα χρησιμοποιείται συνεχώς, συνιστάται το ρυθμιστικό διάλυμα 10x να διατηρείται στους 4°C για 1-2 εβδομάδες. Για μεγαλύτερες χρονικές περιόδους, το ρυθμιστικό διάλυμα πρέπει να φυλάσσεται στους -20°C. Συνιστάται η κατανομή 10x buffer εάν πρόκειται να εκτελεστούν πολλά μικρά πειράματα.
Μπορεί το buffer RIPA να αποθηκευτεί σε;
Το παρασκευασμένο ρυθμιστικό διάλυμα RIPA θα πρέπει να λαμβάνεται σε κλάσματα και να φυλάσσεται στους −20°C. Προσθέστε αναστολείς πρωτεάσης και/ή φωσφατάσης σε ένα αποψυγμένο δείγμα πριν από την άμεση χρήση. Ένα χιλιοστόλιτρο ρυθμιστικού διαλύματος επαρκεί για τη λύση περίπου 5 εκατομμυρίων κυττάρων. …
Πώς αποθηκεύετε τα προϊόντα λύσης RIPA;
Χρησιμοποιήστε παρασκευασμένα λύματα όσο το δυνατόν γρηγορότερα και αποθηκεύστε για όσο το δυνατόν μικρότερο χρονικό διάστημα. Αποθηκεύστε τα λύματα στους -80℃ για όσο το δυνατόν περισσότερο. Για τα λύματα που θα χρειαστεί να διατηρηθούν περίπου μακροπρόθεσμα, μεταφέρετε πρόσφατα παρασκευασμένα σωληνάρια σε διαθέσιμο καταψύκτη -80℃ για να αποτρέψετε την αποικοδόμηση.
Πώς ξεπαγώνετε το ρυθμιστικό διάλυμα RIPA;
Μετά την απομάκρυνση του τελικού διαλύματος πλύσης από τα κύτταρα, προσθέστε έναν κατάλληλο όγκο ρυθμιστικού διαλύματος RIPA (1 ml ανά 0,5 έως 5 × 107 κύτταρα) στο ίζημα των κυττάρων και αναμείξτε ή αναδεύστε για λίγο για να επαναιωρηθούν πλήρως τα κύτταρα. Επωάστε σε πάγο ή στο ψυγείο (2–8 °C) για πέντε λεπτά.
