Ποιος είναι ο καλύτερος τρόπος για να διαχωριστούν οι χλωροπλάστες από το ρυθμιστικό;

2024 Συγγραφέας: Fiona Howard | [email protected]. Τελευταία τροποποίηση: 2024-01-10 06:35

Για να είναι δυνατή η εξαγωγή των χρωστικών από τους χλωροπλάστες αιωρούνται σε ένα ρυθμιστικό απομόνωσης. Για να μπορέσουμε να εξαγάγουμε τις χρωστικές από τους χλωροπλάστες, πρέπει πρώτα να απαλλαγούμε από το ρυθμιστικό διάλυμα. Ποιος είναι ο καλύτερος τρόπος για να διαχωριστούν οι χλωροπλάστες από το ρυθμιστικό; χρησιμοποιήστε μια φυγόκεντρο για να διαχωρίσετε το

Πώς απομονώνετε έναν χλωροπλάστη;

Στη μέθοδο απομόνωσης χλωροπλάστη, το κυτταρικό τοίχωμα σπάει μηχανικά χρησιμοποιώντας μπλέντερ ή ομογενοποιητή. Στη συνέχεια ο άθραυστος ιστός των φύλλων και τα κυτταρικά υπολείμματα αφαιρούνται με διήθηση. Οι χλωροπλάστες συλλέγονται με φυγοκέντρηση χρησιμοποιώντας βαθμίδα percoll.

Πώς φτιάχνετε ένα ρυθμιστικό διάλυμα απομόνωσης χλωροπλάστη;

Προετοιμάστε την απαιτούμενη ποσότητα 1X ρυθμιστικού διαλύματος απομόνωσης χλωροπλάστη με αραιώστε το ρυθμιστικό διάλυμα 2X 1:1 με νερό dH2O Προσθέστε 10 µL του διαλύματος 10% BSA ανά mL 1X Chloroplast Ρυθμιστικό διάλυμα απομόνωσης. Ακριβώς πριν από τη χρήση, προσθέστε 1 µL DTT ανά 1 mL ρυθμιστικού διαλύματος απομόνωσης χλωροπλάστη. Επισημάνετε αυτό το buffer ως "Complete buffer ".

Τι περιέχει ένα ρυθμιστικό διάλυμα απομόνωσης χλωροπλάστη;

ρυθμιστικό απομόνωσης DNA αποτελούνταν από 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA και 1 mM DTT Η λύση του χλωροπλάστη ελήφθη με επώαση του σφαιρίδιο χλωροπλάστη με 8 ml ρυθμιστικού διαλύματος απομόνωσης DNA, 1,5 ml 20% SDS, 20 μl 2-μερκαπτοαιθανόλης και 30 μl Πρωτεϊνάσης Κ (10 mg/ml) σε σωλήνα φυγοκέντρησης στους 55°C για 4 ώρες.

Ποιο είναι το pH του ρυθμιστικού διαλύματος που χρησιμοποιείται για την ομογενοποίηση των φύλλων σπανακιού στο πρωτόκολλο απομόνωσης χλωροπλάστη;

Το σπανάκι είναι γεμάτο με καλούς χλωροπλάστες και απομονώνονται εύκολα. Θα πρέπει να βάλετε τα φύλλα σε ένα κρύο μπλέντερ με ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 0,1 M, pH 7,5 και 0,5M σακχαρόζη για να μην σκάσουν.