Οδηγίες για την απόψυξη κυττάρων
- Αποψύξτε τα κατεψυγμένα κύτταρα γρήγορα (< 1 λεπτό) σε υδατόλουτρο 37°C.
- Αραιώνετε τα αποψυγμένα κύτταρα αργά προτού τα επωάσετε, χρησιμοποιώντας προθερμασμένο μέσο ανάπτυξης.
- Τα αποψυγμένα κύτταρα σε πλάκα σε υψηλή πυκνότητα για βελτιστοποίηση της ανάκτησης.
- Χρησιμοποιείτε πάντα την κατάλληλη ασηπτική τεχνική και εργάζεστε σε απορροφητήρα στρωτής ροής.
Γιατί γίνεται η απόψυξη των κυττάρων;
Είναι ζωτικής σημασίας η σωστή απόψυξη των κυττάρων προκειμένου να διατηρηθεί η βιωσιμότητα της η καλλιέργεια και να μπορέσει η καλλιέργεια να ανακάμψει πιο γρήγορα. Ορισμένα κρυοπροστατευτικά, όπως το DMSO, είναι τοξικά πάνω από 4 °C. Επομένως, είναι σημαντικό οι καλλιέργειες να αποψύχονται γρήγορα και να αραιώνονται σε μέσο καλλιέργειας για να ελαχιστοποιηθούν οι τοξικές επιδράσεις.
Ποια είναι η διαδικασία απόψυξης;
Η απόψυξη είναι η διαδικασία λήψης ενός κατεψυγμένου προϊόντος από κατεψυγμένο σε θερμοκρασία (συνήθως πάνω από 0°C) όπου δεν υπάρχει υπόλοιπο πάγου, δηλαδή «απόψυξη». Η απόψυξη θεωρείται συχνά ως απλώς η αντιστροφή της διαδικασίας κατάψυξης.
Ποιος είναι ο καλύτερος τρόπος για να παγώσετε κύτταρα;
Παγώστε τα κύτταρα αργά μειώνοντας τη θερμοκρασία περίπου κατά 1°C ανά λεπτό χρησιμοποιώντας έναν κρυοκαταψύκτη ελεγχόμενου ρυθμού ή ένα δοχείο κρυοκατάψυξης όπως το Mr. Frosty», διατίθεται από την Thermo Scientific Nalgene labware (Nalge Nunc). Χρησιμοποιείτε πάντα το προτεινόμενο μέσο κατάψυξης.
Πώς αποψύχετε ένα πρωτεύον κύτταρο;
Σκουπίστε το εξωτερικό του φιαλιδίου των κυττάρων με 70% αιθανόλη ή ισοπροπανόλη. Σε ένα ντουλάπι βιοασφάλειας, στρίψτε το καπάκι κατά ένα τέταρτο για να εκτονώσετε την εσωτερική πίεση και μετά ξανασφίξτε. Ξεπαγώστε γρήγορα τα κύτταρα σε υδατόλουτρο 37°C περιστρέφοντας απαλά το φιαλίδιο. Αφαιρέστε το φιαλίδιο όταν παραμείνει μικρή ποσότητα πάγου.
